上海必优生物科技有限公司

产品简介
RIDASCREEN®FAST Ei / Egg Protein（订货号：R6402）快速全蛋检测试剂盒，采用夹心酶联免疫法，用于定量检测食品中的全蛋含量。
试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂，包括标准品。本试剂盒已使用针对ELISA的NIST RM8445（全蛋粉）标准品进行校准。
试剂盒足够进行48次检测（包括标准测定）。
定量分析需要使用微孔板酶标仪。
样品处理： 均质、提取和离心
检测时间： 样品制备（以10个样品为例）.................约20分钟检测过程（孵育时间）...................................30分钟
检测限： 0.27 mg/kg 全蛋粉NIST RM8445
（相当于0.07 mg/kg 蛋清蛋白）
定量限： 0.5 mg/kg 全蛋粉
（相当于0.13 mg/kg 蛋清蛋白）
特异性： 特异性多克隆抗体可结合蛋清蛋白。
与鸡肉、火鸡肉、猪肉或者生/熟的牛肉无交叉反应。
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1. 用途
RIDASCREEN®FAST Ei / Egg Protein快速全蛋检测试剂盒，采用夹心酶联免疫法，用于定量检测食品，如面条、沙拉调味汁、香肠、葡萄酒、蛋糕或面包的混合烘焙物及冰淇淋等中的蛋含量。
本试剂盒已使用针对ELISA方法的NIST RM 8445标准品（全蛋粉）进行了校准和验证。
2. 概要
蛋可作为原料成份之一或外源污染物出现在未经加工的及经煮过的食品产品中。根据2003年11月10日欧盟指令2003/89/EG，食品标签上必须标明蛋会导致过敏。
蛋内含有9 至11 %的蛋白质，而80 %的蛋白质为（四种）主要过敏蛋白质。这四种主要过敏蛋白质分别是卵类粘蛋白（11 %）、卵清蛋白（54 %）、卵转铁球蛋白（12 %）和溶解酵素（3.5 %）。蛋黄中的蛋白质过敏性则稍弱一些。
3. 检测原理
微孔板中包被有针对蛋清蛋白的特殊抗体。加入标准品或样品，其中含有的蛋清蛋白和特殊的抗体结合。没有结合的部分在洗涤步骤中被除去。随后加入过氧化物酶标记的抗体（酶连接物）。抗体酶连接物和抗体抗原复合物结合，形成抗体-抗原-抗体复合物（“三明治”夹心法）。没有结合的酶连接物在洗涤步骤中被除去。将底物/发色剂加入孔中。酶连接物将发色剂转化为蓝色的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450 nm 处测量。吸光度值与样品中的蛋浓度成正比。
4. 试剂盒组份
每一个盒中的试剂足够进行48个试验（包括标准测定），盒中的组份如下：
1 x 48孔微孔板（6条每条8孔） 包被有针对蛋清蛋白的抗体
5 x 标准品*），每瓶1.3 ml 0 ppm（零标准品），0.5 ppm，1.5 ppm，4.5 ppm，13.5 ppm全蛋粉水溶液，即用型
1 x 酶连接物（0.7 ml）..........................................................................红色瓶盖过氧化物酶标记的抗体，浓缩液
1 x 底物/发色剂（10 ml）.......................................................................棕色瓶盖红色 1 x 反应终止液（14 ml）........................................................................黄色瓶盖含1 N的硫酸
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1 x 过敏原提取缓冲液（125 ml）...........................................................绿色瓶盖 10倍浓缩液1 x 洗涤缓冲液（100 ml）......................................................................棕色瓶盖 10倍缓冲液
*） 已考虑了在样品处理的过程中产生的稀释倍数20。所以样品中蛋浓度可直接从标准曲线中读出。
5. 另需的试剂和设备
5.1. 设备：
−微孔板酶标仪（450 nm）
−离心机 + 离心管
−振荡器
−水浴锅
−粉碎机，研钵，Ultra-Turrax匀浆机或者均质器
−刻度移液管
−可调式20 μl - 200 μl 和200 - 1000 μl 微量移液器
5.2. 试剂：
−蒸馏水或去离子水
6. 操作者应该注意之事项
建议由经过相关培训的实验人员进行本试剂盒的使用操作。请严格按照说明书的要求使用本试剂盒。
洗涤缓冲液中含有硫柳汞。避免皮肤接触。
反应终止液含1 N硫酸（R36/38， S2-26）。
7. 储存条件
保存试剂盒于 2 - 8 °C，试剂盒组份不要冷冻。
将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封储存于2 - 8°C条件下。
红色底物/发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
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对过了有效期（见试剂盒外标签有效期）的试剂盒不再提供任何质量保证。
不能交叉使用不同批号的盒中试剂。
8. 试剂变质的迹象
−红色底物/发色剂在使用前颜色变蓝
−标准品5的吸光度值小于0.8（E450 nm < 0.8）
9. 样品处理
操作设备如粉碎机、玻璃容器或抹刀在每次处理样品前后完全清洁，以去除残留的蛋，避免污染。
过敏原提取缓冲液为10倍浓缩液。在稀释前在水浴锅中37 °C条件下充分溶解可能出现的结晶并混合。然后对加热后的浓缩液按比例1:10（1+9）用蒸馏水稀释（例如：100 ml缓冲液浓缩液 + 900 ml蒸馏水，或者直接加入蒸馏水至1250 ml）。稀释后的提取缓冲液在2 - 8 °C条件下可保存约12周。
− 5 g样品小心粉碎，研磨并充分混合
−取其1 g样品，加入20 ml提取缓冲液，在60 °C条件下提取10分钟，提取缓冲液的温度应为约60 °C。
−样品离心：至少10 min / 2500 g / 尽量保持4 °C 或者对提取液进行过滤（也可以取2 ml提取液加入到新的试管中，10分钟高速离心）
−取100 μl上清液每孔进行检测
备注：
样品提取物在2 - 8 °C条件下可保存3天。不用的提取物在-20 °C条件下可保存数月。
10. 检测步骤
10.1. 检测前的准备
使用之前将所有试剂回温至室温（20 - 25 °C）。
抗体酶连接物（红色瓶盖瓶子）为11倍浓缩液。由于稀释的酶连接物的弱稳定性，所以只稀释实际需用量的酶连接物物。在吸取浓缩液之前，要轻轻的振摇以便充分混均。用蒸馏水以1:11（1+10）的比例稀释酶连接物浓缩液（例如：200 μl浓缩液 + 2.0 ml蒸馏水，足够2个微孔板条用）。
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洗涤缓冲液为10倍浓缩液，在稀释前如果存在结晶，应在37 °C水浴锅中加热使其完全溶解并充分混合。对加热后的浓缩液按比例1:10（1+9）用蒸馏水稀释（例如：100 ml缓冲液浓缩液 + 900 ml蒸馏水）。稀释后的缓冲液在2 - 8 °C条件下可保存约4周。
10.2. 检测操作
仔细洗板非常重要。避免在操作过程中微孔出现干燥。
每次检测不应使用多于3条微孔板条（24孔）。
1. 将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插入微孔板架，记录下标准品和样品的位置。
2. 将100 μl标准品及处理好的样品溶液加到相应的微孔中，在室温条件下（20 - 25 °C）孵育10分钟。
3. 倒出孔中的液体，将微孔板架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打3 次）以保证完全除去孔中的液体。每孔加入250 μl洗涤缓冲液（参见10.1.）洗涤微孔。上述操作重复进行两遍。
4. 向每一个微孔中加入100 μl稀释后的酶连接物溶液（参见10.1.），充分混合，在室温条件下（20 - 25 °C）孵育10分钟。
5. 倒出孔中的液体，将微孔板架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打3 次）以保证完全除去孔中的液体。每孔加入250 μl洗涤缓冲液（参见10.1.）洗涤微孔。上述操作重复进行两遍。
6. 向每一个微孔中加入100 μl底物/发色剂，充分混合后在室温（20 - 25 °C）条件下暗处孵育10 分钟。
7. 向每一个微孔中加入100 μl 反应终止液，充分混合。在加入反应终止液后10 分钟内于450 nm 处测量吸光度值。
11. 结果评估
请使用R-Biopharm德国拜发公司专门为RIDASCREEN® 系列产品设计的应用软件RIDA® SOFT Win（订货号：Z9999）来进行结果分析。使用Cubic spline功能进行结果评估。关于标准曲线请参看试剂盒中附带的质保证书。
如果零标准品的E450 nm较高，可认为是未充分洗涤或被污染。
如果样品吸光度值（E450 nm）大于标准品5的吸光度值，应继续稀释后再次检测，以使稀释后的检测结果在标准曲线的可读范围之内。
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请注意：
如果完全按照试剂盒说明书中介绍的方法进行样品处理和检测，那么样品的稀释倍数为20。全蛋粉浓度可直接从标准曲线上读出（已考虑稀释倍数20（参见4*））。
如果采用大于1:20的稀释倍数，在计算全蛋粉浓度时应考虑实际的稀释倍数。
本试剂盒已使用针对ELISA方法的NIST RM 8445标准品（全蛋粉）进行了校准和验证。试剂盒的检测结果以mg/kg全蛋粉的形式得出。RM8445标准品的总蛋白含量为49%。若将检测结果乘以0.49，便可得出样品中总蛋白的mg/kg（ppm）含量。若将检测结果乘以0.263，则可以得出样品中蛋清蛋白的mg/kg（ppm）含量。
计算举例：
从标准曲线上读出的检测结果为10 mg/kg全蛋粉。若将这个结果乘以0.49便可得到样品中含有的总蛋白为4.9 mg/kg（ppm），若乘以0.263便可以得到样品中含有的蛋清蛋白含量为2.63 mg/kg（ppm）。
建议：
为了保证获得高度可靠的检测效果：
−每个样品均进行双平行检测
−取一个完全不含蛋的样品和一个人工添加了蛋粉的样品作为质控样品，同时检测